Item – Theses Canada

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OCLC number
364912030
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Author
Carufel, Karine de,1979-
Title
Mutagenèse par la technologie du transposome chez Actinobacillus pleuropneumoniae.
Degree
Thèse (M. Sc.)--Université du Québec à Trois-Rivières, 2008.
Publisher
Ottawa : Library and Archives Canada = Bibliothèque et Archives Canada, [2008]
Description
1 microfiche
Notes
Comprend des références bibliographiques
Abstract
La pleuropneumonie porcine est une maladie qui engendre d'importantes pertes économiques dans l'industrie de l'élevage de porc. Cette maladie est causée par la bactérie 'Actinobacillus pleuropneumoniae ' (App). Plusieurs facteurs sont impliqués dans l'infection et une des façons de lutter efficacement contre cette maladie est d'étudier les gènes de virulence de la bactérie. La mutagenèse aléatoire par transposition constitue l'approche expérimentale utilisée dans cette étude pour déterminer les facteurs de virulence chez App. Cette méthode permet de connaître indirectement la fonction du gène interrompu par l'insertion du transposon. Un gène interrompu implique une fonction perdue. L'obtention de plusieurs mutants portant le transposon à des endroits différents est souhaitable pour une plus large analyse du génome de la bactérie. Dans un premier temps, nous avons testé le transposon commercial EZ-Tn5< R6K[gamma]'ori'/KAN-2> de la compagnie Epicentre ayant une résistance à la kanamycine. Nous pensions obtenir des mutants spontanés chez App avec la kanamycine. C'est pourquoi, nous avons construit un transposon sur mesure possédant une autre résistance à un antibiotique, la tétracycline. Cependant, seulement 6 mutants ont été obtenus en 3 essais avec le transposon commercial dont 4 ont été caractérisés par séquençage. Bien que les résultats soient insuffisants, il ne semble pas avoir de sites préférentiels "hot-spots" mais peut-être une tendance du transposon à s'insérer dans l'ARN ribosomial 16S et 235. Alors, contrairement aux appréhensions du départ, il y a peu de mutants spontanés mais les mutants de transposition sont peu nombreux avec EZ-Tn5< R6K[gamma]ori/KAN-2>. Ensuite, le transposon construit portant une résistance chromosomique à la tétracycline (tetR) et une mutation au site ' Sau'3AI a été testé chez App. Le transposon désigné AppEZ-Tn5 tetR s'est avéré beaucoup plus efficace que le transposon commercial. Nous avons obtenu 114 colonies sur milieu sélectif dont seulement 13 ne semblaient pas avoir le transposons lorsque testés par détection PCR. L'ADN de 42 mutants ayant intégré le transposon à l'intérieur de leur génome ont été séquence. Après analyse, 34 mutants montraient des sites d'insertion (répétition directe de 9 pbs) différents et 30 mutants portaient une mutation dans des gènes ayant une fonction différente. Somme toute, le transposon AppEZ-Tn5 tetR permet l'analyse de plus de gènes différents par son nombre plus important de mutants par rapor au transposon EZ-Tn5< R6K[gamma]ori/KAN-2> original de la compagnie Epicentre. Finalement, 59 mutants restant ayant le transposon construit seront à analyser par séquençage et éventuellement, ils pourront servir à élaborer la banque de mutants nécessaire à l'étude des gènes de la bactérie. Mots clés: 'Actinobacillus pleuropneumoniae', facteurs de virulence, mutagenèse, transposon, mutants, génomique.
ISBN
9780494376904
0494376902