Item – Theses Canada

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OCLC number
1132135724
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Author
Moutaoufik, Mohamed Taha,
Title
Étude de la structure et de la fonction de la petite protéine de choc thermique DmHsp27
Degree
Philosophiæ doctor (Ph. D.) -- Université Laval, 2017
Publisher
Québec : Université Laval, 2017
Description
1 ressource en ligne (xxiii, 192 pages) :illustrations en partie en couleur, fichier PDF (8,23 Mo)
Notes
Titre de l'écran-titre (visionné le 21 juin 2018).
Bibliographie : pages 147-174.
Abstract
Les petites protéines de choc thermique (sHsps : small heat shock proteins) sont présentes en nombre variable dans tous les organismes. Le génome de Drosophila melanogaster encode 12 sHsps, avec une expression au cours de développement, une localisation intracellulaire et une spécificité de substrats différents. DmHsp27 est l'une des rares sHsps à avoir une localisation nucléaire avant et après un choc thermique. Cette localisation nucléaire est inhabituelle, d'autant plus qu'aucune fonction spécifique de cette protéine n'a encore été identifiée. Les mécanismes responsables de la localisation nucléaire de DmHsp27 ainsi que sa probable fonction dans le noyau restent peu connus. L'étude des orthologues de DmHsp27 chez les insectes a permis de déterminer que la localisation nucléaire n'est pas spécifique à DmHsp27 et d'autres sHsps chez les insectes présentent le même signal de localisation nucléaire que DmHsp27. Le réseau d'interaction de DmHsp27 nous laisse croire que cette protéine ne joue pas seulement le rôle de chaperon moléculaire, mais qu'elle est probablement impliquée dans différents processus nucléaires. Au niveau structurel, contrairement aux sHsps chez les métazoaires, DmHsp27 forme deux populations d'oligomères non en équilibre. Des mutations indépendantes de trois arginines hautement conservées au niveau du domaine alpha-cristallin (R122, R131 et R135) à la glycine affectent l'oligomérisation par formation d'une seule population de grand poids moléculaire. In vitro, l'activité de chaperon de DmHsp27WT est comparable à celle de ses deux populations isolées et à celle des mutants R122G, R131G et R135G utilisant la luciférase comme substrat. Cependant, dans un essai de protection contre l'aggrégation de l'insuline, l'activité de chaperon de DmHsp27 est inférieure à celle des mutants R122G et R131G. Une stratégie de délétion et mutation a été utilsée pour étudier le rôle de la région N-terminale sur l'oligomérisation et la fonction chaperon de DmHsp27. Tel que déterminé par chromatographie d'exclusion et gel natif, des mutations au niveau de F29, G30 et G32 présentent des structures oligomériques différentes de celle du type sauvage. Aucun de ces mutants sauf l'élimination complète de la région N-terminale n'a montré une perte d'activité chaperon, suggérant un rôle important dans la reconnaissance et liaison de substrat. Étonnamment, les deux glycines (G30 et G32) conservées chez les orthologues de DmHsp27 agissent comme régulateurs négatifs de l'activité chaperon; leurs mutations améliorent grandement la prévention d'agrégation d'insuline. La différence du rendement de la protéine sauvage et des mutants G30R et G32R à prévenir l'agrégation de l'insuline à 20 °C et à 42 °C a permis d'établir un lien entre la structure et la fonction chaperon de DmHsp27 et de définir le mode d'action de DmHsp27 suite au stress thermique. En résumé, cette étude a permis de caractériser DmHsp27 et ses mutants au niveau du domaine alpha cristallin et de la région N-terminale et a donné un aperçu d'un nouveau mécanisme de protection contre l'agrégation des sHsps. Le rôle de chaperon moléculaire joué par DmHsp27 et son induction durant le développement embryonnaire laisse cependant présumer que cette protéine remplit d'autres fonctions cellulaires importantes.
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Subject
Heat shock proteins.
Protéines de choc thermique.
Protéines de choc thermique